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Corning康寧澳洲胎牛血清使用中常會碰到的問題是什么

更新時間:2017-06-09瀏覽:2410次

   我們在應用Corning康寧澳洲胎牛血清的過程中,常會遇到一些問題,該如何應對呢。我們根據經驗整理如下:

  1、如何儲存和解凍Corning康寧澳洲胎牛血清才不會使產品質量受損?

  將血清從冷凍箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室溫下使之全融。但必須注意的是,融解過程中必須規則地搖晃均勻。

  長時間儲存在2-8℃時,血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。因此,推薦在-20℃以下儲存血清,并避免反復凍融。

  建議血清應保存在-2O℃。若存放于4℃時,請勿超過一個月。若一次無法用完一瓶,建議無菌分裝血清至恰當的滅菌容器內(由于血清結凍時體積會增加約10 %, 必須預留此膨脹體積之空間,否則易發生污染或容器凍裂之情形),再放回冷凍。

  2、Corning康寧澳洲胎牛血清中包含絮狀沉淀,它們是什么,怎么處理?

  沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白。這是正常特性,不會影響產品性質。要除去沉淀,離心血清(400g,1-2分鐘)或者簡單的讓其沉淀在瓶子底部,將血清小心的轉移到另一個無菌瓶里(一般不建議采用過濾的方法除去沉淀,因為沉淀會堵塞濾膜而無法過濾)。大多情況輕輕搖動沉淀并加熱至37℃就會再溶解。所以,使用產品時要搖動并加熱血清至37℃,沉淀會自然消失。

  3、如何避免Corning康寧澳洲胎牛血清中產生沉淀?

  按如下操作可避免沉淀的產生:

  (1)解凍血清時,請隨時將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發生。

  (2)血清分裝凍存時,須規則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一。

  (3)勿將血清置于37℃太久,否則血清會變得渾濁,同時血清中許多較不穩定的成份也會因此受到破壞,從而影響血清的品質。

  (4)勿直接由-20℃直接至37℃解凍,因溫度改變太大,容易造成蛋白質凝結而發生沉淀。

  (5)血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無須做此步驟。

  (6)若必須做血清的熱滅活,請遵守56℃,30分鐘的原則,并且隨時搖晃均勻。溫度過高,時間過久或搖晃不均勻,都會造成沉淀物的增多。

  4、胞培養中出現黑點是污染嗎?如何處理?

  一旦您在細胞培養的過程中發現有黑點生成,首先,要肉眼觀察培養基是否混濁,然后,在鏡下觀察培養細胞生長的狀態,黑點是否游動。如果細胞被污染,微生物則會大量繁殖,培養基就會迅速變黃、變混濁。污染包括細菌污染、支原體污染等。

  如果在鏡下觀察細胞,生長狀態良好,與黑點出現前相比,沒有任何變化,那么黑點的出現可能與以下幾種情況有關:

  (1)細胞生長過老,破碎的細胞殘骸;

  (2)配制培養基的水質、容器不合格。可應用離心、過濾的方法去除這些黑點;

  (3)血清質量不好,反復凍融的結果;

  (4)配制培養基的pH值偏高,不宜細胞生長;

  (5)培養原代細胞中出現小黑點,可能是原代組織中的雜質,多次傳代可以消除。

 

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