產品英文名：BD Rhapsody^TM Single-Cell Analysis System

產品中文名：BD Rhapsody^TM 單細胞分析系統

應用：單細胞的RNA-seq測序，基因表達分析。Onco-BC 靶向檢測，免疫反應檢測，T-細胞靶向檢測。

優勢：同時分析數千個細胞，每個細胞提取獨立數據，體現異質性。

品牌產地：美國BD

BD Rhapsody^TM 單細胞分析系統及更多BD產品由華雅再生醫學旗艦公司：紅榮微再（上海）生物工程技術有限公司 代理。紅榮微再以“傳遞科學價值，服務科學研究”為宗旨，主營干細胞、精準醫療、細胞治療、器官再生四大板塊的產品。

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BD Rhapsody^TM 單細胞分析系統

數千個單細胞數百個基因的平行分析

單細胞 RNAseq 正在改變我們對細胞的理解。BDRhapsody™單細胞分析系統基于 BD 在細胞生物學領域 40年的專業技術，滿足您的實驗需求，在單細胞水平理解細胞形態和功能。

這種全新的分析系統克服了傳統檢測的局限性，例如微陣列和大量細胞 RNAseq，這些檢測通過實現對各個細胞之間的微妙差異的觀察，依賴于對多個細胞的平均檢測。用戶可以鑒定和表征新型和罕見細胞類型，其進一步幫助理解從免疫學到腫瘤學等多個領域內的生物學過程。

BD Rhapsody 單細胞分析系統能夠對成千上萬個單細胞的數百個表達基因進行數字定量，提供足夠靈活的定制測定法以滿足任何實驗需要，其有效系統可縮短實驗時間和降低測序成本。

系統組件包括：

□ BD Rhapsody 掃描儀

□ BD Rhapsody 上樣臺

□ BD Rhapsody 卡式芯片

□ 分子標簽試劑和文庫制備

□ 特定應用的靶向檢測試劑盒（panel）

BD Rhapsody 單細胞分析系統工作原理

下圖顯示了該系統如何實現對數百個基因的基因表達水平進行數字化定量。其采用新的平面陣列微孔用于細胞捕獲并進行基于微球的 3'RNAseq 測定。

開始 - 細胞捕獲和分離步驟

BD Rhapsody 卡式芯片可以在磁性的寡核苷酸條形碼標記微球上實現單細胞捕獲和 mRNA 轉錄子的分子標簽。然后將這些微球合并到單個管中用于 cDNA 擴增和文庫構建。

1.在微孔中，一個細胞與一個條碼標記微球匹配

2.裂解細胞將 mRNA與微球上條碼標記的捕獲寡核苷酸雜交

3. 微球回收

4. cDNA 合成

5. 測序和構建單細胞基因表達譜

克服 PCR 偏差 – BD 分子標簽

當對序列讀取進行計數時，PCR 擴增偏差可導致基因定量不準確。BD 的分子標簽技術為單個細胞的單個基因分配了*的分子索引，也稱為“分子條形碼”。實驗者可借此克服擴增偏差，更準確地計算轉錄水平。

為您的實驗定制工作流程

對于不同用戶和實驗，單細胞實驗工作流程往往需要不同程度的樣本操作、質量和通量。BD 儀器選項可以根據具體需求進行配置。BD FACS 分選機（如 BD FACSMelody™）是 BD Rhapsody 系統上游樣本富集的良好選擇。BD Rhapsody掃描儀提供自動化細胞計數和細胞樣本活性測試，幫助用戶制備適用于卡式芯片單細胞捕獲的*濃度的樣本。掃描儀提供了卡式芯片上微球捕獲細胞的計數。BD Rhapsody 上樣臺輕巧便攜，可在實驗室內輕松移動。同樣還提供生物信息學途徑和可視化工具。這些工具包括 UMI 分析算法和可視化工具，即使沒有經驗的用戶也可分析和理解單細胞數據。

圖. 實例：BD Rhapsody 工作流程，包括細胞分離（FACS 可選），細胞捕獲和分子標簽、測序和數據分析。

1. 樣本

2. 通過 BD Rhapsody 進行單細胞

3. 在 Illumina 平臺上進行測序

4. BD 基因組數據分析

更有效的測序可以更低的成本實現更高的通量

由于與高通量實驗方法相關的測序成本，單細胞實驗往往非常昂貴。BD Rhapsody 單細胞分析系統設計有多個功能，可以更有效地利用測序來降低實驗成本。

靶向測定 - 由于檢測靈敏度的提高，特定的基因組合方法可使用少量的時間和成本，幫助產生類似于全轉錄組分析（Whole Transcriptome Analysis，WTA）測定的結果。這種方法還提高了 UMI 計數效率，從而極大程度的節省了實驗時間和成本。

儲存 - 從樣本中得到的完整 cDNA 可在磁性微球上穩定存儲，允許將珍貴樣本保存長達 16 周。這可使用戶在時間允許的情況下靈活地對樣本進行測序，并通過對儲存的微球池進行等分或分樣來實現同一樣本的多個測定。

分樣—在磁性微球上儲存的 cDNA A 可以分成一個或多個等分試樣，并使用定制或預先設計的組合（panel）進行擴增。通過提供對部分樣本進行測序的選項和對樣本不同組合（panel）進行測試的靈活性，分樣可降低成本。

評估 BD Rhapsody 的性能

為了確定 BD Rhapsody 單細胞分析系統的技術性能，將人 293T 和小鼠 NIH / 3T3 細胞的 1：1 混合物以不同濃度上樣到 BD Rhapsody 卡式芯片上。儲存的 cDNA 分子普遍擴增并進行低通量測序（每個細胞約8,700 個讀數）。在測序數據中檢測到 1,109 個細胞的上樣條件下，每個細胞中，來自每個細胞的平均 99.4％的分子經檢測僅為人或小鼠，這表明微孔之間的串擾非常小。在測序數據中檢測到 1，000 個或更少細胞的上樣密度下，多重態發生率接近零，并且在 15，000 個細胞下小于 5％。

圖：使用 BD Rhapsody 的微孔之間的zui小串擾和低多重態率

使單細胞測序效率更高

靶向方法對單細胞分析的益處通過使用競爭產品的WTA 測定和 BD Rhapsody 免疫反應組合（panel）（人）在相似的測序深度下對外周血單核細胞（PBMC）進行表達譜分析來證明。雖然兩種測定方法的 t-SNE 表達譜分析都顯示了已知 PMBC 細胞類型的聚類結果，靶向組合（panel）顯示了比 WTA 更高的靈敏度（讀數/細胞）和 UMI 計數效率。BD Rhapsody 測定實現了與競品 WTA 測定類似的聚類性能，而測序讀數降低了近 10 倍（靶向讀數 2k vs. WTA 讀數 20k）。與使用 WTA 方法不同，靶向組合（panel）避免了對多個高表達基因的測序如核糖體蛋白或低表達變異性，從而提高測定效率。

混合微球的測試儲存（參見下圖），從含有稀少轉移性乳腺癌細胞的淋巴結所得的 1，000 個細胞的兩個分樣使用BD Rhapsody Onco-BC 靶向組合（panel）進行分析。在 4℃下保存微球，在 0、6 和 12 周對樣本進行測定。在分樣之間基因表達具有很強的相關性，表明儲存 cDNA 具有極小的批次效應和較高的穩定性。

主要應用的靶向基因檢測試劑盒（panel）

靶向方法有助于提高單細胞測序效率，并推動對當今一些挑戰性的科學領域的進一步探索。我們經驗證的檢測試劑盒（panel）顯示穩定且可重現的細胞異質性陣列，可用于探索與眾多應用相關的細胞類型。BD Rhapsody 系統包括以下檢測試劑盒（panel）：

● BD Rhapsody Onco-BC 靶向檢測試劑盒（panel） – 與乳腺癌和免疫細胞相關的 400 個基因

● BD Rhapsody 免疫反應檢測試劑盒（panel） – 免疫細胞類型譜分析

● BD Rhapsody T-細胞靶向檢測試劑盒（panel）

● BD Rhapsody 補充檢測試劑盒（panel）

● BD Rhapsody 自定義檢測試劑盒（panel）

高級軟件和可視化功能增加您結果的靈活性

BD Rhapsody 系統還提供生物信息學途徑和可視化工具。這些工具包括 UMI 分析算法和可視化工具，即使沒有經驗的用戶也能夠分析和理解單細胞數據。

1. 序列發生器輸出.fastq 文件

• 多路分用 讀數；調準讀數
• 計算每個細胞每個基因的*分子標識符（UMI）
• 執行 UMI 調整算法
• 進行細胞標記篩選
• 單細胞表達譜

BD Rhapsody 系統數據集可從 www.xxxxx。。ｃｏｍ 下載

實例數據集：

◎ 來自健康捐贈者的 PMBC 的單細胞譜分析

◎ T 細胞表型分析

◎ 乳腺癌腫瘤活檢的單細胞譜分析

單細胞研究的完整端到端系統

BD Rhapsody 單細胞分析系統通過完整的工具系統（包括試劑和分析軟件）來加強和簡化您的研究，這些工具可以協同工作，以滿足您*的單細胞實驗需求。我們將使您直接通過樣本獲取結果，同時使用實驗成本和復雜性顯著降低的測定方法節省時間和成本，改善數據和提高測序效率。40 年來，BD 一直是單細胞生物學領域值得信賴的合作伙伴。您可以依靠我們來幫助您拓展單細胞分析的新領域。

BD Rhapsody^TM 單細胞分析系統及更多BD產品由華雅再生醫學旗艦公司：紅榮微再（上海）生物工程技術有限公司 代理。紅榮微再以“傳遞科學價值，服務科學研究”為宗旨，主營干細胞、精準醫療、細胞治療、器官再生四大板塊的產品。

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